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微量加樣器(移液器)使用的一般原則
2011-11-25
1727
微量加樣器(移液器)使用的一般原則在免疫測(cè)定及其他生物醫(yī)學(xué)研究中,加樣器的使用離不開一次性的塑料吸頭,盡管一次性塑料吸頭的使用增加了實(shí)驗(yàn)費(fèi)用,但降低了實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員接觸傳染性病原體及有害實(shí)驗(yàn)材料如放射性核素的可能性,并且避免了吸頭多次重復(fù)使用所必需的清潔過程和腐蝕性去垢劑的使用。此外,在有些應(yīng)用上,如PCR測(cè)定中,吸頭必須是一次性的,以避免潛在污染發(fā)生的可能性。加樣器根據(jù)使用的要求,也在不斷發(fā)展。如可整體高壓滅菌加樣器的出現(xiàn)。使用UV線穩(wěn)定的塑料制作加樣器對(duì)于加樣器在許多方面的...
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酶標(biāo)記抗體法標(biāo)記抗體的制備
2011-11-22
1621
酶標(biāo)記抗體法標(biāo)記抗體的制備酶標(biāo)記抗體法(enzaymelabelledantibodytechnique)是用結(jié)合物將酶結(jié)合在抗體分子上,制備成酶標(biāo)記抗體,通過抗原—抗體反應(yīng)使抗原—抗體復(fù)合物上帶有酶分子,再借助酶對(duì)底物的特異性催化作用,在抗原—抗體反應(yīng)部位形成不溶性有色產(chǎn)物,用于研究抗原物質(zhì)分布和性質(zhì)。酶標(biāo)記抗體法又分為直接法和間接法,目前應(yīng)用zui多的酶是辣根過氧化酶(HRP),底物是3,3’—二氨基聯(lián)苯胺(DAB)??贵w蛋白分子與酶分子(如HRP或AKP)以一定的方式相...
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哺乳動(dòng)物細(xì)胞的RNAi技術(shù)策略
2011-11-16
1725
哺乳動(dòng)物細(xì)胞的RNAi技術(shù)策略目前RNAi技術(shù)已經(jīng)進(jìn)入了生物科學(xué)研究的許多領(lǐng)域,成為了一種主要的生物學(xué)研究工具,發(fā)展得相當(dāng)迅速,并受到了此次諾貝爾獎(jiǎng)評(píng)審委員會(huì)的青睞,獲得2006年諾貝爾獎(jiǎng)醫(yī)學(xué)/生理獎(jiǎng)。然而這一才歷經(jīng)十個(gè)年頭的技術(shù)依然對(duì)于許多研究人員來說還是很陌生的,以下是有關(guān)RNAi技術(shù)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中應(yīng)用的具體設(shè)計(jì)策略,主要來自于《遺傳》雜志2005年“RNA干涉(RNAi)技術(shù)應(yīng)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的研究策略”,希望能給從事或者準(zhǔn)備從事RNAi相關(guān)實(shí)驗(yàn)的研究人員以幫助。哺乳...
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生物素-親和素系統(tǒng)(BAS)ELISA和免疫組化技術(shù)
2011-11-7
3532
生物素-親和素系統(tǒng)(BAS)ELISA和免疫組化技術(shù)20世紀(jì)70年代后期在免疫酶技術(shù)中利用生物素-親和素系統(tǒng)(biotin-avidinsystem,BAS)標(biāo)記抗體發(fā)展了又一種新型生物反應(yīng)放大技術(shù),即BAS-ELISA技術(shù),它使用生物素-親和素-過氧化物酶復(fù)合物作為指示劑,組成一新的生物放大系統(tǒng)進(jìn)一步提高檢測(cè)的敏感度。生物素(biotin)是廣泛分布于動(dòng)植物體內(nèi)的一種生長(zhǎng)因子,又稱輔酶R或維生素H。親和素(avidin)是卵白及某些微生物中的一種蛋白質(zhì),由4個(gè)亞單位組成。二...
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PCR-ELISA法診斷禽流感
2011-11-3
2038
PCR-ELISA法診斷禽流感PCR-ELISA是將一步RT-PCR技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附法相結(jié)合,檢測(cè)病毒的一項(xiàng)診斷技術(shù)。PCR的一對(duì)引物中,其中一個(gè)用生物素標(biāo)記、另一個(gè)用地高辛標(biāo)記,在酶標(biāo)微孔板上用親和素包被,PCR擴(kuò)增后純化片段加入微孔板中。此時(shí),微孔板上包被的親和素將與生物素標(biāo)記引物上的生物素特異性結(jié)合而捕捉了PCR片段,然后在微IL板中加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗地高辛抗體,該抗體將與地高辛標(biāo)記引物上的地高辛結(jié)合,從而形成親和素-生物素-PCR片段-地高辛-地高辛抗體-辣...
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酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)診斷豬囊尾蚴病病
2011-11-1
2461
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)診斷豬囊尾蚴病病目前實(shí)驗(yàn)室開發(fā)的新型檢測(cè)方法主要是以ELISA及改良的ELISA為主。分別用5種不同改良的ELISA平行檢測(cè)囊蟲抗體:ABC-ELISA、經(jīng)典ELISA、SPA-ELISA、快速法ELISA和BAELISA,試驗(yàn)結(jié)果差異不顯著,說明方法學(xué)的選擇主要依據(jù)習(xí)慣和試驗(yàn)的目的。N.S.Odashima(2002)用ELISA法診斷不同的患者群血清中抗體的種類,發(fā)現(xiàn)ELISA—lgG敏感度zui高,分別達(dá)到88.5%和93.2%,這說明該方...